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    解讀文獻里的那些圖——流式細胞術(shù)
    來源: 時間:2025-01-14 09:28:36 瀏覽:5417次

    解讀文獻里的那些圖——流式細胞術(shù)

     

    流式細胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)是一種高度靈敏的分析技術(shù),它利用激光照射單個細胞或微粒,通過檢測散射光和熒光信號來分析細胞的物理和化學(xué)特性;這項技術(shù)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中扮演著核心角色。

    一、基本原理

    流式細胞術(shù)的核心在于將細胞懸液通過一個非常細小的噴嘴,形成單細胞流,這些細胞逐一通過激光束。細胞與激光相互作用產(chǎn)生兩種散射光信號和多個熒光信號:

    前向散射光(FSC):反映細胞的大小,因為大細胞會散射更多的光到前方。

    側(cè)向散射光(SSC):體現(xiàn)細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜度,如細胞內(nèi)顆粒的多少和密度。

    熒光信號:當細胞表面或內(nèi)部的特定分子被熒光標記的抗體結(jié)合后,被激發(fā)的熒光素發(fā)出特定波長的光,用于定量分析特定蛋白質(zhì)或核酸的存在和表達水平。

    二、圖像類型與解讀

    1. 直方圖

    單參數(shù)直方圖:展示單一參數(shù)(如FSCSSC)的分布情況。橫坐標表示該參數(shù)的強度,縱坐標表示具有該強度的細胞數(shù)量。例如,通過FSC直方圖可以區(qū)分大小不同的細胞群體。

    2. 散點圖

    雙參數(shù)散點圖:同時展示兩個參數(shù)(通常是FSCSSC,或兩個熒光信號)的分布,每個點代表一個細胞,點的密集程度表示該區(qū)域細胞數(shù)量。通過設(shè)置“門”(Gating),可以選取特定的細胞群體進行分析,比如區(qū)分淋巴細胞和粒細胞。

    3. 等高線圖與等密度圖

    這些圖型進一步可視化了散點圖中的數(shù)據(jù)密度,顏色或灰度的變化表示細胞密度的增加,有助于識別不同細胞群的重疊區(qū)域,尤其是在多參數(shù)分析中。

    三、應(yīng)用實例

    免疫表型分析:通過標記特定的細胞表面抗原,如CD4+ T細胞,流式細胞術(shù)可以精確計數(shù)并分析這些細胞的比例。

    細胞周期分析:使用DNA染料(如PI)標記細胞,通過FSC和熒光信號分析,可以區(qū)分G1SG2/M期的細胞,評估細胞增殖狀態(tài)。

    凋亡檢測:利用標記活細胞和凋亡細胞的熒光探針,可以區(qū)分正常細胞、早期凋亡細胞和晚期凋亡/壞死細胞。

    四、數(shù)據(jù)分析與解釋

    門的設(shè)定:在分析過程中,研究者會根據(jù)直方圖或散點圖設(shè)定門,以圈定感興趣的細胞群體,這一步驟對于準確識別和量化特定細胞至關(guān)重要。

    多參數(shù)分析:現(xiàn)代流式細胞儀能夠同時分析多個熒光通道,提供細胞的多維度信息,這對于復(fù)雜細胞群體的解析尤為重要。

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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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