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一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

來源：時間：2023-11-23 16:18:24 瀏覽：27317次

一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

HE染色法，又稱蘇木素-伊紅染色法，是一種廣泛應用于組織學、胚胎學和病理學教學與科研中的染色方法。

一、基本原理

HE染色法利用兩種染料，即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅，分別與細胞核和細胞質發(fā)生作用，使細胞的微細結構通過顏色改變其折光率，從而在光鏡下清晰地呈現(xiàn)出細胞圖像。染色過程中既有化學反應，又有物理作用參與。

從化學反應來看，組織細胞內含有酸性物質和堿性物質。細胞的酸性物質與堿性染料的陽離子結合，細胞核的堿性物質與酸性染料的陰離子結合。因此，酸性細胞核被堿性的蘇木素染成藍色，而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。從物理現(xiàn)象來看，主要有吸附和吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色，是細胞化學染色中最常用的一種方法。

二、實驗步驟

1. 樣品制備：對于貼壁生長細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1105/ml，滴加于蓋玻片上（置于6孔板中），培養(yǎng)相應時間后，取出細胞爬片，用PBS洗滌3次。

2. 樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

3. 染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

4. 分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

5. 染胞質：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。

6. 吹干或自然晾干細胞爬片后，中性樹膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

三、注意事項

1. 染色時調節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染蘇木精后，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行。一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色后再行分色。

3. 切片經酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，重新脫水。

4. 脫蠟。切片脫蠟后才能染色，且脫蠟應徹底。脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間。如果二甲苯是用過一段時間，切片又比較厚，室溫低應增加脫蠟時間。

5. 在染色過程中，各種試劑的使用順序、濃度和時間應嚴格按照實驗步驟操作，以免影響染色效果。

6. 實驗結束后，要清潔實驗臺和儀器設備，妥善保存試劑，以免影響下次實驗。

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